多用途分光光度计又称光谱仪(spectrometer),是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780nm的可见光区和波长范围为200~380nm的紫外光区。不同的光源都有其*的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的380~780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后,可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源。
1、波长设置
输入需要测试的波长(如核酸测260nm,蛋白质测280nm),或通过光谱扫描确定特征吸收峰。
2、空白对照
使用与样品溶剂相同的空白溶液(如蒸馏水、缓冲液)作为参比,校正基线。
将空白液放入比色皿(通常为石英或塑料材质),放入样品室,点击“调零”或“基线校正”。
3、样品测试
取出比色皿,倒入适量样品(通常需2-3mL),避免溢出或气泡。
将比色皿重新放入样品室,关闭盖板,点击“测量”获取数据。
如需多次测量,重复上述步骤,注意比色皿方向一致性(标记朝向光源)。
4、数据处理
吸光度法:直接读取吸光度值(A),根据朗伯-比尔定律(A=εLC)计算浓度。
标准曲线法:测量不同浓度标准品的吸光度,绘制标准曲线,再代入样品吸光度计算浓度。
光谱分析:记录吸收峰波长、峰值高度、谷值等参数,用于物质鉴定或纯度分析。
5、保存与导出
保存测量数据(如吸光度、波长、浓度等),导出为Excel、PDF或图片格式。
标注样品名称、测试条件(波长、光径、溶剂等)以便后续分析。